主要依据蛋白质具有抗原性的特性对特定蛋白质进行鉴定。目前常用的特异性鉴定方法有：免疫印迹法、免疫斑点法、免疫双扩散法、免疫电泳法等。重组蛋白常用免疫印迹法或免疫斑点法进行鉴定，特别是当电泳出现两条或两条以上区带时则应用免疫电泳法进行鉴定。免疫印迹法也称酶联免疫电转移印斑法，亦被称为Western blot，是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的杂交技术。免疫印迹法具有分析容量大、敏感度高、特异性强等优点，是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方法。

免疫印迹法分三个阶段进行。第一阶段为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）；第二阶段为电转移：通常采用半干胶转移方法，将电泳已经分离的条带转移至硝酸纤维素膜上；第三阶段为酶免疫定位：将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜（相当于包被了抗原的固相载体）依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用后，加入能形成不溶性显色物的酶反应底物，使区带染色。具体操作步骤如下：

1.取样品上样，电泳，转膜缓冲液于4℃预冷；

2.取PVDF膜用甲醇浸泡，取出，浸泡于转膜缓冲液备用；

3.将方盘中放入转膜缓冲液，在液面下进行转膜装置的安装；

4.将转膜装置放入电泳槽中，倒入转膜缓冲液，100V转膜2小时；

5.停止转膜，取出PVDF膜，将膜标记正反面及电泳方向；

6.用PBST洗涤5分钟2次，再用封闭液4℃封闭过夜；

7.取出PVDF膜，用PBST快速冲洗2遍，再洗涤15分钟1次，5分钟4次，洗膜时均放于摇床上；

8.将一抗用PBST 1∶5000稀释，与PVDF膜一同装入杂交袋中，勿留气泡，37℃摇床4小时；

9.取出PVDF膜，用PBST快速冲洗2遍，再洗涤15分钟1次，5分钟4次，洗膜时均放于摇床上；

10.将二抗用PBST 1∶2000稀释，与PVDF膜一同装入杂交袋中，勿留气泡，37℃摇床1小时；

11.取出PVDF膜，用PBST快速冲洗2遍，再洗涤15分钟1次，10分钟4次，洗膜时均放于摇床上；

12.DAB显色，水洗终止反应，膜干后拍照保存。